|
|
Úloha variabilních řetězců na rozhraní podjednotek ve formování ATP-vazebné kapsy a funkci P2X4 receptoru
Tvrdoňová, Vendula ; Zemková, Hana (vedoucí práce) ; Novotný, Jiří (oponent) ; Vlachová, Viktorie (oponent)
5 ABSTRAKT Krystalizace P2X4 receptoru (P2X4R) ze zebřičky ("zebra fish", zfP2X4) v uzavřeném a otevřeném stavu odhalila změny v konformacích ektodomény včetně změn v oblasti styčných ploch mezi levou ("left flipper"; LF) a hřbetní ("dorsal fin"; DF) ploutví. Roli těchto struktur ve formování ATP vazebné kapsy a funkci receptoru jsme zkoumali pomocí alaninové skenovací mutageneze úseků LF (D280-N293) a DF (R203-L214) potkaního P2X4R, a s využitím ATP a analogických agonistů 2-(methylthio)adenosin 5'- trifosfátu, adenosin 5'-(γ-thio)trifosfátu, 2'(3'-O-(4-benzoylbenzoyl)adenosin 5'- trifosfátu a α,β-methylenadenosin 5'-trifosfátu. Sníženou citlivost anebo účinnost ATP mělo 15 z 26 vytvořených mutací. Mutace R203A, N204A a N293A byly v podstatě nefunkční, ale jejich funkci bylo možné obnovit ivermektinem, alosterickým modulátorem P2X4R. Mutace I205A, T210A, L214A, P290A, G291A a Y292A měly změněnou odpověď na ATP a na analogické agonisty. Naproti tomu mutace L206A, N208A, D280A, T281A, R282A a H286A nevykazovaly ve srovnání s divokým typem receptoru žádnou změnu v odpovědích na ortosterické agonisty. Tyto pokusy, společně s homologním modelováním ukázaly, že aminokyseliny z první skupiny nacházející se v horní části obou řetězců LF a DF, se podílejí na přesné organizaci ATP-vazebné kapsy a iniciaci převodu...
|
|
|
Účinek zvýšené koncentrace oxidu uhličitého na množství a aktivitu enzymu Rubisco
Zachová, Lucie ; Babák, Libor (oponent) ; Hrstka, Miroslav (vedoucí práce)
V této diplomové práci byly sledovány změny počáteční a celkové aktivity a obsahu enzymu Rubisco u buku lesního (Fagus sylvatica) a smrku ztepilého (Picea abies) v podmínkách normální, tj. 350 mol·mol–1 (A–ambient) a zvýšené, tj. 700 mol·mol–1 (E–elevated) koncentrace CO2. Vzorky byly odebírány na začátku vegetační sezóny po plném rozvinutí listů a dále uprostřed a na konci vegetační sezóny. Aktivita Rubisco byla stanovena spektrofotometricky a z počátečních a celkových aktivit byl vypočítán stupeň aktivace. Obsah enzymu byl stanoven metodou SDS–PAGE.. Aktivita Rubisco u buků kultivovaných v prostředí zvýšené koncentrace CO2 téměř lineárně klesala, zatímco u buků kultivovaných v minisféře s přirozeným obsahem CO2 došlo v průběhu sezóny k poklesu aktivity a poté k jejímu zvýšení. Obsah Rubisco u buků kultivovaných v A mírně narůstal a u buků kultivovaných v E došlo nejprve k poklesu obsahu a poté k jeho zvýšení. Aktivity u smrků kultivovaných v A i E klesaly téměř paralelně. Obsah Rubisco u smrků kultivovaných v A klesal téměř lineárně v průběhu vegetačního období, ale u smrků kultivovaných v E došlo v průběhu sezóny k prudkému snížení obsahu a poté k jeho zvýšení.
|
host ::
RSS.